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稳定细胞系构建

服务简介

细胞转染,是将外源分子(如 DNA,RNA 等)导入真核细胞中的一种技术;

转染分为:瞬时转染和稳定转染

瞬时转染:指外源 DNA 或 RNA 转入宿主细胞后不整合到宿主染色体中进行外源目的基因的表达

稳定转染:指外源 DNA 转入宿主细胞后将外源目的基因整合到宿主染色体中进行表达

稳定转染的特点:

1. 目的基因整合到染色体上,需要使用线性 DNA(线性 DNA 虽然比超螺旋状的 DNA 转入量低,但整合率高)

2. 外源 DNA 整合到宿主细胞染色体中大约为 1%,通常需要通过一些选择性标记反复筛选,才能得到稳定转染的同源细胞系

3. 随宿主细胞基因组复制、转录、翻译,并被稳定遗传

4. 用于获得稳定表达的外源基因的单细胞克隆:如大规模蛋白质的合成,长期的药理学研究遗传机制的研究等

稳定细胞株:一般是将外源 DNA 克隆到具有某种抗性或者选择基因的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中,用载体中所含的选择标志进行筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白的细胞株

 

稳定细胞株构建流程

服务优势

高质:外源基因严格鉴定,细胞来源清晰,无污染

高产:重组蛋白 / 抗体表达量可快速优化至 2g/L 以上稳定表达

稳定:独有的 GS 稳转系列载体配合 MSX 药物筛选,实现稳定传代 15 代以上

快速:筛选高产细胞株,周期短至 3 个月

灵活定制:可针对重组蛋白 / 抗体全长或片段进行个性化表达

经验丰富:专业的技术团队,已成功为国内外多家医药公司和研究单位构建交付稳定细胞株

多筛选系统:G418/ 潮霉素 / 嘌呤霉素筛选系统,GS/DHFR 双基因筛选系统等

服务内容

服务项目

客户提供

服务内容

服务周期

交付内容

稳定细胞株构建

基因序列

载体

细胞

重组表达质粒构建

1周

1-3株细胞株

技术服务报告

药物本底浓度测定

1-2周

细胞转染

1天

多克隆稳定细胞株筛选及鉴定

2-3月

单克隆稳定细胞株筛选及鉴定

2月

稳转细胞株产量、活性检测及稳定性研究(可选)

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案例展示

构建生产重组抗体的CHO稳定细胞株

稳定细胞株构建