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采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体的具体步骤及原理

发表时间:2024-06-14 访问次数:93

  杂交瘤细胞技术是最常用于制备单克隆抗体的方式,通过将骨髓瘤细胞与免疫后的B淋巴细胞相融合而形成的细胞。融合形成的这个细胞既可以避免B细胞无法无限增殖的缺点,又可以大量制备所需抗体。也正因为这个特性,使得其在临床试验中得到了广泛的应用。那么,杂交瘤细胞技术的操作流程是怎样的呢?

杂交瘤细胞技术

  1、免疫小鼠。通过抗原提取或定制,得到纯度较高的抗原,而后将其注入到小鼠体内。当然了,为了免疫成功,间隔一段时间后再次对小鼠进行免疫,多轮免疫后,确保免疫成功;

  2、细胞提取。当小鼠免疫成功后,提取出脾脏,并将其分离出来;

  3、细胞融合。将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,形成杂交瘤细胞;

  4、细胞筛选。将杂交瘤细胞放入培养基中,通过相关技术手段,筛选出合适的杂交瘤细胞;

  5、细胞扩增。将筛选出的杂交瘤细胞进行扩增,并收集齐上清液;

  6、蛋白纯化。通过亲和层析等技术,对所得单克隆抗体进行纯化;

  7、蛋白鉴定。通过一些手段对单克隆抗体进行特异性、亲和力等方面特性的鉴定;

  当然了,随着相关技术的不断发展,各种单克隆抗体制备的技术营运而生,如Single B兔单克隆抗体制备等技术。但是,其在技术需求方面有着一定的要求,需要结合实际情况来选择。

  大规模单克隆抗体制备的流程是怎样的?

  对于大规模单克隆抗体制备来说,在主要流程上大体相同,但是在一些细节方面有着一定的不同。

  1、免疫小鼠。将抗原注入小鼠体内,使得其产生免疫反应;

  2、淋巴细胞分离。提取免疫成功后的小鼠脾细胞;

  3、细胞融合。将脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合;

  4、抗体筛选与鉴定。将杂交瘤细胞筛选和鉴定;

  5、抗体生产。对杂交瘤细胞进行扩增,大规模培养,而后实现抗体的大规模生产;

  相对其他抗体制备方式来说,杂交瘤细胞技术无论是在制备技术要求上还是制备成本上都有着极大的优势,适用于大部分抗体制备的情况。当然了,杂交瘤技术也有着一定的局限性,比如操作步骤繁琐、抗体鼠源性等,但是,相信随着技术的不断发展,这些问题将会得到解决。更多有关杂交瘤技术的相关知识,敬请关注普健生物。