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纳米抗体制备的一般过程是怎样的?

发表时间:2024-06-12 访问次数:83

  纳米抗体是一种从驼类动物以及鲨鱼等动物体内提取的一种天然缺失轻链的抗体,因为其结构很小,达到纳米级,因此被称为纳米抗体。纳米抗体的可溶性极高,而且不易聚集、耐高温、耐强酸强碱等,适用于各种原核、真核蛋白的表达。下面,普健生物和大家具体聊聊有关纳米抗体制备的具体过程。

纳米抗体制备

  1、目的基因提取

  从动物体内(驼类动物或鲨鱼)提取所需的RNA和cDNA,通过相关的生物技术手段,将其提取出来并进行克隆表达;

  2、纳米抗体基因构建

  通过选择适当的引物,对VHH基因进行扩增。而后将扩增后的VHH基因克隆到表达载体(一般包含启动子、标记基因以及VHH基因等)中;

  3、选择合适的蛋白表达系统

  一般来说,原核表达与真核表达的选择是各不相同的。对于原核表达系统来说,可以选择大肠杆菌表达系统来表达,而对于真核表达系统过来说,可以选择哺乳动物表达系统来进行表达;

  4、蛋白表达及优化

  通过细胞转染或细菌感染的方式,将目的基因转染到表达载体中,通过对相关培养条件进行优化(比如温度、培养基成分、转染时间等),从而提升纳米抗体的表达概率;

  5、细胞培养

  通过调控相应的培养条件,对转染后的细胞进行培养,使得目的基因随着蛋白的表达而表达,而后通过相关细胞破碎技术,将蛋白释放出来,而后通过离心等方式获得细胞上清液;

  6、蛋白纯化

  通过亲和层析法(通过特异性靶标结合的特性,使用亲和层析柱来提升其纯度)、透析法(在进行亲和层析后,进行透析,去除其中的杂质)、离心法(利用超速离心的方式去除细胞碎片和大颗粒物)等方式,提升蛋白的纯度;

  7、蛋白评估

  对蛋白进行纯度、功能等各方面特性的评估,而后将其进行冻存,以实现其长期保持的稳定性;

  以上就是纳米抗体制备的一般表达过程,当然了,对于不同的公司来说,因为技术、仪器、技术团队等方面的区别,其制备过程有着一定不同,但是,总体来说是大体相同的。而纳米抗体制备的具体流程,需要结合目的蛋白的不同方式来进行选择,这样才能更好地获得所需蛋白。更多纳米抗体制备的相关知识,敬请关注普健生物。