生物素与链霉亲和素的亲和常数达 1015 mol/L，是目前已知最强的非共价相互作用，广泛用于SPR/BLI亲和力测定、噬菌体展示筛选、ELISA信号放大等场景。标记质量直接影响下游实验数据——标记不均一会导致批间结果不可比，标记位点选择不当会遮挡蛋白活性区域。
本服务采用 Avi-Tag 酶促定点标记技术，通过BirA连接酶将生物素精确连接至蛋白末端单一位点，标记后蛋白活性与未标记蛋白一致。每批次交付前经 HABA 法定量检测标记比（DAR），并可选 ELISA/SPR 活性验证。
Avi-Tag 酶促定点标记原理
蛋白需预先融合15个氨基酸的Avi-Tag序列（N端或C端）。大肠杆菌BirA连接酶特异性识别该序列，通过酶促反应将单个生物素分子连接至Avi-Tag内的赖氨酸残基。标记位点唯一且远离蛋白功能区域，标记后蛋白的结合活性、构象和稳定性与未标记蛋白保持一致。
在SPR/BLI实验中，单点标记使蛋白在SA传感器芯片上以统一方向固定，活性表位均匀暴露，结合/解离曲线重复性更好、拟合残差更低。在噬菌体展示淘选中，靶标蛋白的定向固定可避免表位遮挡，有助于富集高亲和力克隆。
| 技术特性 | 说明 |
|---|---|
| 对活性的影响 | 标记位点在蛋白末端（N端或C端），不接触功能区域。标记蛋白与未标记蛋白在ELISA及SPR中结合能力一致 |
| 固定方向性 | 单位点标记，固定于SA芯片/磁珠后蛋白方向一致、活性表位均匀暴露，SPR/BLI结合曲线散点更小 |
| 批间一致性 | 酶促反应，DAR恒定为1，批间差异极小。每批经HABA法定量验证 |
| 适用实验 | SPR/BLI亲和力测定、Biopanning噬菌体展示筛选、定向固定ELISA、FACS |
| 前提条件 | 蛋白须融合Avi-Tag序列（15个氨基酸），纯度≥85%，浓度≥0.5 mg/mL |
| 客户提供 | 服务步骤 | 服务周期 | 交付内容 |
|---|---|---|---|
| 含Avi-Tag的纯化蛋白 纯度≥85% 浓度≥0.5 mg/mL |
BirA酶促反应，生物素定点连接至Avi-Tag赖氨酸残基 | 1~2周 标记：0.5~1周 QC：约1周 |
生物素标记蛋白 QC报告： · SDS-PAGE · HABA标记比（DAR） · ELISA/SPR活性验证（可选） 技术服务报告 |
| 脱盐纯化，去除游离生物素 | |||
| QC检测：SDS-PAGE + HABA标记比 + 活性验证（可选） |
* 以上周期为标准参考值，具体以项目评估为准。
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