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杆状病毒昆虫细胞表达系统表达重组蛋白的优劣势

发表时间:2024-06-03 访问次数:134

  杆状病毒昆虫细胞表达系统(Baculovirus Expression Vector System, BEVS)是一种以昆虫细胞为宿主细胞,依托杆状病毒为外源基因载体,从而实现外源基因表达的表达系统。在生物制备领域中,昆虫杆状病毒表达系统是一种强大的工具。

杆状病毒昆虫表达系统

  杆状病毒昆虫表达系统的制备流程:

  1、质粒构建。将提取出的目的基因插入到杆状病毒基因中(主要是线性或环状的DNA质粒);

  2、细胞转染。将构建的质粒转染到选定昆虫细胞中,使得目标基因得以表达;

  3、蛋白表达。对所得细胞进行培养,使得目标基因得以转录和翻译,从而实现目标蛋白的表达;

  4、蛋白包装。将病毒颗粒释放到培养基中,从而获得以及纯化所需目的蛋白;

  杆状病毒昆虫表达系统的常用方法:

  1、转染方法。转染的方法很多,比如钙磷沉淀法、电穿孔法等;

  2、标记方法。利用对表达载体进行标记,从而实现细胞的筛选;

  杆状病毒昆虫表达系统的优势:

  1、安全性高。因为制备过程中仅采用杆状病毒来转染昆虫细胞,不会感染到其他细胞,所以不会对人体造成影响;

  2、表达高效。通过各种酶的使用,使得蛋白得以正确折叠以及翻译后修饰,从而实现复杂蛋白的表达;

  3、适合大规模生产。昆虫细胞可以在无血清的培养基中生长,从而实现大规模生产;

  4、应用广泛。在蛋白功能研究、药物发现研究等方面有着广泛的使用;

  杆状病毒昆虫表达系统的局限性:

  1、表达不稳定。因为病毒存在一定的毒性,其会造成宿主细胞的裂解,从而影响蛋白的稳定性;

  2、糖基化水平低。当我们对蛋白进行糖基化时,可能会造成单的不稳定以及免疫原性;

  3、基因组不稳定。杆状病毒基因组会存在一定的不稳定性,从而影响到蛋白的长期表达和稳定性;

  杆状病毒昆虫表达系统的注意事项:

  1、需要选择合适的表达系统。结合目的蛋白的性质来选择合适的表达载体,从而确保载体与目的基因的相容性;

  2、对表达条件进行优化。对于不同的昆虫细胞,需要结合其感染以及培养条件,选择最优的培养条件;

  3、对实验进行合理地设计。相对其他表达系统来说,杆状病毒昆虫表达系统存在一定的复杂性,需要对其实验过程进行合理地设计;

  杆状病毒昆虫表达系统存在着极大的优势,不仅高效,而且在蛋白修饰方面有着极大的优势,为生物学以及制备领域研究有着极大的优势。通过对其原理以及流程、操作等方面的调整,能够更好地实现蛋白的表达。当然了,这套蛋白表达系统也存在着一定的不足之处,需要结合具体的情况来进行选择。更多蛋白表达的相关知识,敬请关注武汉普健生物。