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如何在大肠杆菌表达系统中实现高通量表达

发表时间:2024-05-29 访问次数:110

  在生物技术发展的今天,蛋白表达在科学研究以及临床治疗中起着非常重要的作用。而在基因技术发展的今天,蛋白的需求日益增加,大肠杆菌表达系统因为其遗传背景清晰、成本低以及生长迅速的优势,使得其成为重组蛋白表达的首选。

大肠杆菌表达系统

  什么是高通量蛋白表达技术?

  高通量蛋白表达技术其实就是一种能够实现大规模、高效的制备蛋白的技术,可以通过不同的方法来实现目标蛋白的表达。

  高通量蛋白表达的步骤有哪些?

  1、目的基因制备

  作为蛋白表达,基因制备是第一步。目的基因的提取方法有很多,传统的方法主要是通过从cDNA文库中提取。但是,这种方法存在一定的局限性,费时费力,而且难以添加融合标签。现阶段常用的方法主要采用PCR技术,设计好引物后,即可在PCR仪中完成目的基因的提取;

  2、高通量表达系统构建

  和传统的蛋白表达系统构建相似,高通量蛋白表达系统的构建没有特别大的改动,只是说在一些细节方面有着一定的不同。比如在目的基因转录和表达之前需要添加融合标签,以便于提升其表达效率;

  3、菌株培养

  在表达系统构建成功后(一般来说,我们会选择大肠杆菌菌株来进行表达),而后选择出合适的菌株。当然了,对于大肠杆菌的培养来说,我们尽量选择分批培养,这样才更加有利于菌株的控制;

  4、高通量蛋白表达及纯化

  采用高通量的平台,能够实现迅速地进行基因克隆、挑选菌落、质粒分离、蛋白表达以及蛋白纯化等操作。当然了,虽然说这个平台的构建相对困难,但是,对于那些复杂的分子实验来说,往往能提供极大的便利;

  采用大肠杆菌表达系统来实现高通量重组蛋白的表达,能够在极大程度上推进蛋白的表达进程。虽然说在其技术水平上有着一定的要求,但是随着技术的不断优化和创新,能够让其更加高效且可靠的进行蛋白表达。