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客户背景
在水产养殖领域，鱼类疾病防控是全球性难题，疫苗和佐剂的研究备受关注。近期发表在《Fish and Shellfish Immunology》的一篇研究（DOI: 10.1016/j.fsi.2025.110415）展示了草鱼补体C5a C端肽（C5a-CP）作为疫苗佐剂的卓越潜力。这项研究由华中农业大学和珠江水产研究所联合完成，揭示了C5a-CP在增强草鱼IgM⁺B细胞吞噬活性和提高疫苗免疫效果方面的关键作用，为鱼类疫苗佐剂的开发提供了重要理论基础。
客户需求
研究中需要表达草鱼IgM重链恒定区（IgM-CH）并制备抗C5aR的多克隆抗体（pAbs），以验证C5a-CP的免疫调节机制。
技术难点
1. 蛋白表达与纯化：草鱼IgM-CH等鱼类蛋白因其特殊结构和序列特性，在异源表达系统中（如大肠杆菌）易发生错误折叠或低表达量，需优化表达条件和纯化流程。
2. 抗体特异性：抗C5aR抗体的制备需针对特定抗原表位（如C5aR N端肽）设计，确保抗体能特异性结合目标蛋白，同时避免非特异性信号干扰。
3. 功能验证：重组蛋白和抗体需在复杂的生物学实验（如吞噬实验、Ca²⁺动员检测）中保持生物活性，需严格的质量控制。
技术服务方案
我们提供一站式蛋白表达与抗体定制服务，助力草鱼C5a-CP研究：
1. 重组IgM-CH表达与纯化：
（1）肠杆菌系统中表达GST标签IgM-CH（GenBank: DQ417927.1），通过IPTG诱导及梯度尿素透析复性，确保蛋白纯度>95%及ELISA检测活性。
（2）采用亲和层析结合BCA法定量，保证蛋白符合标准曲线构建需求（0.015625-0.25 μmol/L）。
2. 抗C5aR pAbs定制与验证：
（1）针对C5aR N端肽（DYGPFDFSNESYSC）设计抗原，制备兔源pAbs，通过免疫荧光和流式细胞术验证特异性，确保C5aR⁺细胞准确标记。
（2）交付周期4-6周，满足项目进度。
3. 功能验证支持：
（1）提供ELISA检测IgM-CH活性，流式细胞术验证抗C5aR pAbs在IgM⁺ B细胞中的特异性。
（2）支持Ca²⁺动员（Fluo4-AM）和吞噬实验（荧光微珠），确保C5a-CP功能验证可靠。
我们的蛋白表达和抗体定制技术可确保IgM-CH蛋白和抗C5aR抗体的稳定供应，支持其在疫苗佐剂开发中的关键验证。研究结果表明，C5a-CP显著提高草鱼对Aeromonas hydrophila和GCRV-II的免疫保护率（RPS达96.03%），为鱼类疫苗佐剂开发开辟新路径。
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