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AtaGenix专业蛋白表达与抗体定制服务,助力草鱼C5a-CP佐剂研究

发表时间:2025-06-06 访问次数:36

客户背景

  在水产养殖领域,鱼类疾病防控是全球性难题,疫苗和佐剂的研究备受关注。近期发表在《Fish and Shellfish Immunology》的一篇研究(DOI: 10.1016/j.fsi.2025.110415)展示了草鱼补体C5a C端肽(C5a-CP)作为疫苗佐剂的卓越潜力。这项研究由华中农业大学和珠江水产研究所联合完成,揭示了C5a-CP在增强草鱼IgM⁺B细胞吞噬活性和提高疫苗免疫效果方面的关键作用,为鱼类疫苗佐剂的开发提供了重要理论基础。

客户需求

  研究中需要表达草鱼IgM重链恒定区(IgM-CH)并制备抗C5aR的多克隆抗体(pAbs),以验证C5a-CP的免疫调节机制。

技术难点

  1. 蛋白表达与纯化:草鱼IgM-CH等鱼类蛋白因其特殊结构和序列特性,在异源表达系统中(如大肠杆菌)易发生错误折叠或低表达量,需优化表达条件和纯化流程。

  2. 抗体特异性:抗C5aR抗体的制备需针对特定抗原表位(如C5aR N端肽)设计,确保抗体能特异性结合目标蛋白,同时避免非特异性信号干扰。

  3. 功能验证:重组蛋白和抗体需在复杂的生物学实验(如吞噬实验、Ca²⁺动员检测)中保持生物活性,需严格的质量控制。

技术服务方案

  我们提供一站式蛋白表达与抗体定制服务,助力草鱼C5a-CP研究:

  1. 重组IgM-CH表达与纯化:

  (1)肠杆菌系统中表达GST标签IgM-CH(GenBank: DQ417927.1),通过IPTG诱导及梯度尿素透析复性,确保蛋白纯度>95%及ELISA检测活性。

  (2)采用亲和层析结合BCA法定量,保证蛋白符合标准曲线构建需求(0.015625-0.25 μmol/L)。

  2. 抗C5aR pAbs定制与验证:

  (1)针对C5aR N端肽(DYGPFDFSNESYSC)设计抗原,制备兔源pAbs,通过免疫荧光和流式细胞术验证特异性,确保C5aR⁺细胞准确标记。

  (2)交付周期4-6周,满足项目进度。

  3. 功能验证支持:

  (1)提供ELISA检测IgM-CH活性,流式细胞术验证抗C5aR pAbs在IgM⁺ B细胞中的特异性。

  (2)支持Ca²⁺动员(Fluo4-AM)和吞噬实验(荧光微珠),确保C5a-CP功能验证可靠。

  我们的蛋白表达和抗体定制技术可确保IgM-CH蛋白和抗C5aR抗体的稳定供应,支持其在疫苗佐剂开发中的关键验证。研究结果表明,C5a-CP显著提高草鱼对Aeromonas hydrophila和GCRV-II的免疫保护率(RPS达96.03%),为鱼类疫苗佐剂开发开辟新路径。

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