每月研报：盘点普健生物2026年9月文献锦集

三阴性乳腺癌（TNBC）缺乏明确的分子靶点，紫杉类化疗仍是主要手段，但受剂量依赖性毒性和耐药限制。γδ-T细胞可不依赖MHC直接杀伤肿瘤细胞，其在TNBC中的浸润水平与较好预后相关，但能否与紫杉类协同尚不清楚。该研究以TNBC细胞系及其紫杉醇耐药亚系、患者来源类器官和小鼠移植瘤模型为对象，结合转录组与蛋白组分析、基因敲低和体内治疗实验，发现低剂量紫杉醇和多西他赛在抑制肿瘤细胞增殖的同时并不损伤γδ-T细胞，反而促进其增殖并增强效应功能，两者联合在体内外均表现出协同抗肿瘤作用。机制上，紫杉类处理可诱导γδ-T细胞分泌ANXA6和PPP2R1A，二者在乳腺癌中高表达与较好生存相关，并富集于细胞死亡相关通路；敲低任一基因均削弱细胞上清的杀伤能力，外源补充重组蛋白可恢复活性，且两种蛋白能直接诱导TNBC细胞凋亡。在耐药细胞系、化疗难治患者来源类器官和耐药移植瘤模型中，该协同效应依然成立，并可清除肿瘤干细胞样细胞。研究认为低剂量紫杉类通过重编程γδ-T细胞实现化疗与免疫的协同，为克服TNBC耐药和降低化疗毒性提供了新思路。

胶质母细胞瘤（GBM）是成人最常见的恶性脑肿瘤，mTORC1过度激活是其重要特征，但mTORC1如何将营养信号传递到细胞核内的DNA修复机器尚不清楚。DDA1是CRL4^CSA泛素连接酶复合物的调节亚基，参与转录偶联核苷酸切除修复，在多种肿瘤中上调，但作用机制不明。该研究以胶质瘤细胞系和原位移植瘤模型为对象，结合亲和纯化质谱、磷酸化蛋白质组、转录组和基因编辑分析，发现DDA1在溶酶体表面与mTORC1核心组分Raptor直接结合，但并不位于mTORC1上游；氨基酸刺激可诱导mTORC1依赖的DDA1第33位丝氨酸磷酸化，该修饰受RagA和Rheb双重调控，并在脊椎动物中高度保守。磷酸化后DDA1由胞质转入细胞核，与CRL4^CSA复合物的结合增强，促进紫外损伤后的核苷酸切除修复，而磷酸化缺失突变体无法恢复细胞克隆存活；转录组分析提示该通路还参与调控若干代谢基因的表达。体内实验中，敲除DDA1可抑制肿瘤生长、增加DNA损伤，并削弱肿瘤对营养补充的响应，临床数据库分析也显示DDA1高表达与预后不良相关。研究认为mTORC1–DDA1^S33–DNA修复轴将营养感知与基因组维持联系起来，可能成为胶质瘤的干预靶点。

光合作用中光反应与暗反应的协同是维持高效率和光保护的基础，但植物如何调控这一过程尚不清楚。钙依赖蛋白激酶（CPK）在逆境信号转导中作用广泛，作者前期发现水稻突变体oscpk12表现出对光强敏感的表型，提示其可能参与光适应调控。该研究以粳稻野生型、oscpk12突变体及OsAtpD1相关转基因株系为材料，结合蛋白互作验证、体外激酶反应、质谱、叶绿体分离和叶绿素荧光测定分析，发现突变体在强光下出现早衰，叶绿素含量、净光合速率和光系统II最大光化学效率下降，活性氧和丙二醛水平升高。机制上，OsCPK12与叶绿体ATP合酶δ亚基OsAtpD1互作，并磷酸化其转运肽上的一个丝氨酸位点；该位点突变为不可磷酸化形式后，OsAtpD1滞留于细胞质，而磷酸化模拟型可正常进入叶绿体。相应地，突变体、不可磷酸化型过表达株系及OsAtpD1干扰株系的ATP合酶活性、电子传递速率和跨膜质子梯度均降低，OsCPK12过表达株系则高于野生型，磷酸化模拟型过表达可回复突变体的早衰表型。研究认为，光诱导的OsCPK12通过磷酸化OsAtpD1促进其向叶绿体转运，维持ATP合酶活性与质子梯度稳态，实现光胁迫下的光合适应与光保护。

花粉过敏影响全球约三分之一人口，现有变应原免疫治疗存在疗效不稳定、可能诱发IgE介导的过敏反应以及难以建立持久耐受等问题。mRNA疫苗具有抗原可编程、降低IgE交联风险等优势，但其递送所依赖的脂质纳米颗粒本身具有佐剂活性，会带来非特异性炎症，不利于耐受建立。该研究同时从抗原序列和递送系统两方面改造：一方面设计去除信号肽、融合恒定链的非分泌型艾蒿主要变应原mRNA，使抗原在胞内经MHC II通路提呈；另一方面通过筛选PEG脂质链长并引入甘露糖修饰，获得低炎症、靶向抗原提呈细胞的递送制剂。结果显示，该制剂皮下给药后主要在肝脏表达，形成以调节性细胞因子升高为特征的局部耐受微环境，树突状细胞呈现MHC II高、共刺激分子低的耐受表型，脾脏中变应原特异性调节性T细胞扩增。在艾蒿花粉过敏小鼠的治疗和预防模型中，该疫苗均能减轻过敏症状和肺部炎症、降低特异性IgE并纠正IgG亚类比值。研究认为该平台可作为诱导变应原特异性免疫耐受的模块化策略，但耐受的持久性和因果机制仍需进一步验证。

系统性红斑狼疮（SLE）是累及多器官的自身免疫病，适应性免疫异常研究较多，而巨噬细胞等固有免疫亚群在组织损伤中的作用尚不清楚。叶酸受体2（FOLR2）是其他炎症性疾病中促炎巨噬细胞的标志物，尿FOLR2水平也与狼疮肾炎及疾病活动度相关，但其功能未明。该研究整合公共单细胞和转录组数据、临床皮损与肾活检标本、狼疮小鼠模型及体外巨噬细胞实验，发现SLE皮损中真皮巨噬细胞总量与对照相当，但FOLR2阳性亚群明显扩增并成为优势亚群，盘状红斑狼疮中则无此现象；狼疮肾炎肾组织中该受体表达同样升高，皮损中其细胞密度与疾病活动度评分正相关。与健康来源细胞相比，SLE来源的FOLR2阳性巨噬细胞呈现多条炎症通路激活的促炎表型，经免疫复合物刺激后分泌更多促炎细胞因子、吞噬能力下降、抗原提呈和共刺激分子上调。研究进一步构建了叶酸靶向纳米载体，可选择性清除并失活该亚群，使小鼠自身抗体水平下降、皮损和肾脏病理减轻、尿白蛋白肌酐比改善，同时Th1/Th17比例下降、调节性T细胞增加，初步安全性良好。研究认为FOLR2阳性巨噬细胞是SLE中驱动皮肤和肾脏损伤的关键致病亚群，靶向清除可作为替代广谱免疫抑制的精准治疗思路。

马来穿山甲体内已检出多种与SARS-CoV-2亲缘关系较近的沙贝病毒，但其致病性和跨种传播风险此前缺乏系统评估。该研究选取两株穿山甲来源冠状病毒MpCoV-GD和MpCoV-GX，与SARS-CoV-2平行比较，在人源细胞系、类器官和hACE2转基因仓鼠中开展分析。两株病毒在人源细胞和类器官中均可有效复制，但效率低于SARS-CoV-2，其刺突蛋白介导的膜融合能力也弱于后者。在仓鼠模型中，MpCoV-GD造成的肺部病理与SARS-CoV-2相近，表现为广泛的肺泡实质损伤，MpCoV-GX则主要引起轻度炎症浸润和肺泡壁增厚；两株病毒均可经直接接触和气溶胶途径传播，但气溶胶传播时感染性明显减弱。在防治评估中，瑞德西韦和莫努匹韦对两株病毒均有抑制作用，新冠康复者血清和灭活疫苗免疫小鼠血清可交叉中和两者；单克隆抗体S309具有广谱中和活性，而REGN10933和REGN10987仅对MpCoV-GD有效，原因在于MpCoV-GX受体结合域相关表位存在大量氨基酸替换。研究认为穿山甲来源沙贝病毒的致病性和传播能力总体弱于SARS-CoV-2，现有药物和免疫可提供一定交叉保护，但仍需持续开展野生动物病毒监测。

草鱼呼肠孤病毒（GCRV）引起的出血病在草鱼和稀有鮈鲫中致死率高，主要表现为多组织大面积出血，减轻出血症状是提高存活率的关键。蛋白磷酸酶1调节亚基PPP1R3G此前主要在糖原合成和脂代谢领域被研究，其在鱼类固有免疫中的作用尚不清楚。该研究以草鱼肾细胞CIK、K562稳定表达细胞系、HEK293T细胞以及ppp1r3g敲除稀有鮈鲫和ppp1r3g嵌合草鱼为模型，结合免疫共沉淀-质谱、截短与定点突变、免疫组化和免疫荧光开展分析。结果显示，poly(I:C)和GCRV刺激可上调ppp1r3g表达，而敲低ppp1r3g抑制病毒复制并提高I型干扰素水平，提示Ppp1r3g通过与Rig-I、Mda5和Traf6互作负调控RLR通路。体内实验中，基因缺失鱼对GCRV的抗性明显增强、出血症状减轻，免疫相关基因表达上调。机制上，Ppp1r3g经其PP1c结构域的Ser36/37位点结合14-3-3ζ的EL17片段，而整合素β3（Itgb3）同样通过该片段与14-3-3ζ结合，二者存在竞争；Ppp1r3g还以剂量依赖方式经蛋白酶体途径促进Itgb3降解，从而阻碍14-3-3ζ–Itgb3复合物形成、抑制血小板活化和下游凝血级联。研究认为GCRV通过诱导Ppp1r3g同时抑制抗病毒免疫和凝血反应，加重出血症状，该轴可作为出血病防控的潜在靶点。

爱德华氏菌（Edwardsiella piscicida）是一种感染多种经济鱼类并可引起人类感染的革兰氏阴性病原菌，其三型分泌系统（T3SS）通过向宿主细胞注射效应蛋白干预免疫信号，是致病的核心环节，但引发强烈炎症反应的具体效应蛋白及机制此前并不清楚。该研究以小鼠巨噬细胞系J774A.1、HEK293T细胞、黄颡鱼头肾原代白细胞和斑马鱼幼鱼为模型，结合基因缺失菌株、免疫共沉淀、泛素化分析和结构域截短等方法开展研究。结果显示，T3SS效应蛋白EseJ可激活NF-κB通路，促进IL-1β、IL-6等多种促炎细胞因子的转录与分泌，缺失eseJ的菌株诱导能力明显下降。机制上，EseJ通过两个独立结构域干预两条泛素依赖的调控环节：其N端1–242区段结合NF-κB亚基p65，阻止p65发生K48连接的多聚泛素化及蛋白酶体降解，从而维持较高水平的总p65和磷酸化p65，促进其入核和转录活性；中间区段（243–532）同时结合TAK1与TRAF6，作为分子支架稳定TRAF6–TAK1复合物，增强TRAF6介导的TAK1 K27连接泛素化，驱动TAK1磷酸化并激活下游IKK–IκB–NF-κB级联，抑制TAK1后该效应消失。斑马鱼感染实验证实EseJ在体内同样是炎症因子产生所必需。研究认为EseJ通过同时靶向p65和TAK1放大NF-κB依赖的炎症反应，鉴于其同源蛋白在其他革兰氏阴性菌中保守，该机制可能具有普遍性。

蜱传脑炎病毒（TBEV）每年报告病例约一万至一万五千例，现有灭活疫苗主要诱导体液免疫，需多次接种且保护期有限，普遍认为与其激发的T细胞应答较弱有关。人工多表位免疫原是开发T细胞疫苗的可行方向，但连接表位的间隔序列如何影响免疫原性，此前多停留在理论预测，缺乏在同一表位组合内的系统比较。该研究从免疫表位数据库筛选黄病毒T细胞表位并与TBEV蛋白组比对，结合表位预测工具选出13段分别来自E、NS1、NS3和NS5蛋白的寡肽，按三种方式拼接成多表位免疫原：算法优选的含丙氨酸间隔序列、柔性GPGPG间隔序列以及不加间隔序列，三者均在N端融合泛素并构建成相应DNA疫苗。结构预测显示三种设计差异不大，但蛋白表达分析提示GPGPG型的加工方式明显不同，仅以降解产物形式存在。小鼠电穿孔免疫后，含丙氨酸间隔和无间隔两组均能诱导显著的IFN-γ分泌细胞应答，GPGPG组应答很低；三者均未产生针对E蛋白的抗体，符合其仅含T细胞表位的设计。研究认为间隔序列的选择显著影响多表位疫苗的免疫原性，GPGPG在该体系中并不适用，但相关结论目前仅限于单一品系小鼠模型。

年龄相关性黄斑变性（AMD）是老年人视力损害的主要原因，氧化应激被认为是其核心致病机制，目前仍缺乏有效的防治手段。VEGFB是VEGF家族中兼具抗氧化与神经保护作用的成员，其主要功能亚型VEGFB167占转录本八成以上，此前受原核表达产量偏低的限制，难以规模化制备。该研究以pBV220载体在大肠杆菌BL21中建立了不依赖IPTG的温度诱导表达体系，目的蛋白以包涵体形式高效积累，经镍亲和层析、复性和凝胶过滤后获得纯度约 97% 的活性蛋白；在过氧化氢诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤模型中，VEGFB167 呈浓度依赖性地减轻细胞膜损伤和脂质过氧化、降低活性氧水平、提升抗氧化酶活性及相关基因表达，并抑制凋亡、恢复细胞的 DNA 复制与增殖能力。研究认为该流程可稳定制备有生物活性的 VEGFB167，为其作为氧化损伤相关疾病的候选治疗分子提供了实验基础，但现有证据仅来自体外细胞实验，上游受体与下游信号通路尚未阐明，体内有效性仍待验证。