联系我们
检索完几个数据库，现货抗体要么没有你要的种属，要么特异性验证数据是空的，要么干脆没人做过这个靶点，这时候"要不要定制"几乎是绕不开的问题。定制不是一个单选项，它本身也分好几条路，选错路线。多花的是时间和预算。今天小编一篇内容告诉你该怎么决策。
问题1：你的靶点,现货真的没有吗?
先别急着下结论。常见的漏检索情况：
- 只搜了品牌官网,没去UniProt查别名、基因别称
Figure 1.Uniprot官网首页 - 没做跨物种交叉检索：人源没有，但鼠源/兔源也许早就有人做过验证，有时候种属交叉反应性已经够用。
推荐网站：
Ensembl Compara：提供丰富的跨物种资源，可进行全基因组比对、蛋白质同源树分析和直系同源基因搜索，是比较基因组学的重要平台。
Figure 2.Ensembl Compara官网首页 链接：https://www.ensembl.org/info/genome/compara/index.html
scGeneBank：一个用于在单细胞分辨率下跨物种、器官和细胞类型分析功能基因集的大型综合平台。
Figure 3.scGeneBank官网首页 链接：http://8.142.154.29/scGeneBank/
PCMD：一个多层次的植物代谢物比较数据库，支持植物物种间的代谢特征比较和代谢物富集分析。
Figure 4.PCMD官网首页 链接：https://yanglab.hzau.edu.cn/PCMD
FunPlantGenes：一个专门的植物功能基因知识库，旨在促进跨物种比较基因组学研究。
Figure 5.FunPlantGenes官网首页 - 靶点有家族同源问题:比如你要的是某个特定亚型，而现货抗体说明书上根本没写清楚区分到哪个亚型，这种看起来有但用不了的情况很常见。
- 修饰位点或剪切变体特异性：磷酸化、乙酰化、糖基化这类常见修饰还好，碰上刚被发现不久的修饰类型，现货市场基本是空的。比如组蛋白乳酸化(histone lactylation)这个修饰，是芝加哥大学团队2019年才在Nature上首次报道的，这种新发现的修饰位点，没人卖现货才是正常的
把这几步都过一遍，现货依然空白，才真正进入第二步。
问题2：定下来要做，你的需求该走哪条技术路线?
这一步最容易被忽略，但其实是决定周期和成本的关键。同样叫抗体定制，背后对应的是完全不同的实验体系，而且无论靶点是蛋白、多肽、小分子还是完整细胞，基本都能找到对应路线。
你要的是抗体，还是蛋白本身
如果需要的是抗原、标准品，或者做功能验证用的重组蛋白，而不是抗体——这是蛋白表达纯化的范畴，种属、是否分泌表达、是否需要去标签或复性，都会影响最终方案。
已经有候选分子，只是想知道它和靶点结合得紧不紧、作用强不强——这是亲和力检测(SPR/BLI 类)，不产生新分子，只验证已有分子间的结合数据。
需要的是抗体，往下看走哪条路:
- 只是想低成本、短周期拿到一批抗体做内部验证，多克隆抗体制备通常是性价比最高的起点。除了常见的兔、小鼠、大鼠、豚鼠、羊，鸡多抗(IgY)这两年也被越来越多人用，因为IgY和IgG几乎不产生交叉反应，能有效降低多重免疫标记实验的背景信号，而且只需要收集鸡蛋纯化，成本也低；
Figure 7.普健生物能提供多种种属的多克隆抗体定制服务 - 如果这个抗体要长期反复用，甚至走向产品化或更深机制研究，杂交瘤单克隆抗体开发更合适。这条路线技术成熟，核心是细胞融合这一步，细胞株可测序、可重组表达；
- 手上已经有杂交瘤细胞株，但只有上清没有序列，杂交瘤细胞株测序能把它变成可控、可重组的资产，当于把养在细胞里的抗体变成有序列的抗体，而且这一步通常不会太久；
- 想要更高通量地同时验证一批候选,而不是赌一两个克隆，Single B细胞技术是这几年增长比较快的路线，本质是直接从单个B细胞里把抗体基因扩增出来，保留了天然的重轻链配对，在应对突发病原体(比如筛选中和抗体)这类需要"快"的场景里用得比较多；
Figure 8.Single B cell单克隆抗体开发流程 - 有现成天然抗体文库可以淘选，价格低、周期短；或者靶点比较特殊，需要单独构建免疫文库→噬菌体展示技术，两条路线对应的成本和精度不在一个量级上，要先想清楚自己要哪种；
- 已经有现成天然抗体文库可以直接淘选，或者靶点比较特殊,需要单独构建免疫文库，这两条路线都属于噬菌体展示技术，文库能覆盖的物种也不止人和兔，小鼠、羊驼、犬、猫都有人在用；
Figure 9.噬菌体兔单克隆抗体开发流程 - 如果你做的是夹心ELISA开发，需要的不是单一抗体，而是能配对使用的捕获抗体和检测抗体——这是另一类专门的需求，抗体对开发能帮你解决配对的问题
- 如果需要识别磷酸化、乙酰化、糖基化这类修饰位点的抗体，修饰性抗体定制只需要你提供抗原序列和修饰位点就能起步设计
拿到抗体序列之后，常见的后续需求还有
- 想换个表达系统提升产量，或者把鼠源抗体转成嵌合形式 → 抗体表达及纯化；
- 抗体未来要走向治疗性候选药物开发 → 抗体人源化设计及表达纯化，常规交付 500ug/序列，纯度可大于90%；
- 需要一个分子同时结合两个靶点 → 双特异性抗体表达；
- 某个蛋白或抗体后续要长期、稳定、大批量产出(比如要支撑动物实验、药效学研究)，而不是每次都重新做一轮瞬转表达 → 稳定细胞株构建，常规可交付1-3株细胞株。
问题3：不同的定制路线，到底要多久?
不同路线的周期差异不小，天然文库淘选通常比从零构建一个免疫文库快得多，多克隆的免疫周期天然比杂交瘤筛选短。
几周就能拿到结果的(前提是已经有现成的材料)
- 杂交瘤细胞株测序：2周左右
- 噬菌体天然文库淘选：2-4周
- 双特异性抗体开发：5-6周
从头开始,但已经被压得比较短的
- Single B细胞技术开发抗体:免疫周期从传统的8-12周压缩到3周左右,最快45天能拿到抗体，这也是这几年应对突发病原体、需要快速筛选中和抗体时常用的路线。
需要慢慢来的
- 噬菌体免疫文库构建：12-14周，因为要先完成免疫再建库淘选；
- 经典杂交瘤单克隆抗体开发：走完整免疫、融合、筛选、亚克隆这一整套，通常要数月，是这里周期最长的路线之一；
- 多克隆抗体相对快一些，因为不需要反复克隆筛选，免疫加采血纯化就能完成，具体天数还是看物种和加强免疫的次数。
如果deadline很紧，比如本来打算走经典杂交瘤，换成Single B技术路线可能就把周期压回来了。把这三个问题想清楚，基本也就清楚了自己真正要找的是哪种服务。这时候去沟通，会比一开始就说"我要定制个抗体"清楚得多，报价和方案也会更贴你的实际需求。
AtaGenix深耕抗体定制领域，专注于高特异性抗体开发
立即联系我们，定制您的专属研究抗体
